????? 重組腺病毒和野生型均是無(wú)包膜的線(xiàn)性雙鏈DNA病毒，野生型腺病毒在自然界分布廣泛，至少存在100種以上的血清型。其基因組長(cháng)約36kb，兩端各有一個(gè)反向末端重復區(ITR)，ITR內側為病毒包裝信號?；蚪M上分布著(zhù)4個(gè)早期轉錄元(E1、E2、E3、E4)承擔調節功能，以及一個(gè)晚期轉錄元負責結構蛋白的編碼。早期基因E2產(chǎn)物是晚期基因表達的反式因子和復制必須因子，早期基因E1A、E1B產(chǎn)物還為E2等早期基因表達所必須，因此E1區的缺失可造成病毒在復制階段的流產(chǎn)。E3為復制非必須區，其缺失則可以大大地擴大插入容量。重組腺病毒載體大多以5型(Ad5)和2型(Ad2)為基礎，新增了55型(Ad55)。我們所提供所有重組腺病毒載體包括預包裝的腺病毒和腺病毒定制服務(wù)均是都是來(lái)自人類(lèi)的5型腺病毒。

包裝機制：
經(jīng)典的重組腺病毒載體系統如：穿梭質(zhì)粒pCA13/腺病毒基因組質(zhì)粒pBHG11/包裝細胞293細胞。pCA13/的HCMV IE啟動(dòng)子－多克隆位點(diǎn)－SV40 AN(poly A)構成外源基因的表達盒，該表達盒的插入使腺病毒E1基因缺失，但是保留其兩端側翼序列(左側的1~3bp的ITR，右側從3.5kb到末端的維持病毒裝配和活力必須的蛋白IX的基因)，也保留了腺病毒的包裝信號φ(194~358bp)；pBHG11則保留了腺病毒基因組的絕大部分，但是缺失了包裝信號φ、0.5~3.7圖距(mu)部分的E1區、77.5～86.2mu的E3區，293細胞是整合有Ad5 E1基因的人胚腎細胞系。pBHG11因為缺失包裝信號及E1區而不能復制，pCA13帶有包裝信號及E1的側翼序列，但是缺失E1區及腺病毒絕大部分基因組，同樣不能復制。外源目的基因插入pCA13后，與pBHG11共轉染，進(jìn)入293細胞。pCA13與pBHG11在細胞內發(fā)生同源重組，同時(shí)，293細胞提供E1蛋白，從而包裝產(chǎn)生腺病毒顆粒。該病毒的蛋白質(zhì)外殼同野生型腺病毒相似，具有同樣的感染力進(jìn)入靶細胞的能力，但是基因組DNA的E1區被外源目的基因取代，即進(jìn)入靶細胞后病毒不能復制，但可以表達目的蛋白。

分類(lèi)：
一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體稱(chēng)為第一代腺病毒載體，此類(lèi)型載體可引發(fā)機體產(chǎn)生較強的炎癥反應和免疫反應，表達外源基因時(shí)間短。E2A或E4基因缺失的腺病毒載體被稱(chēng)為第二代腺病毒載體，產(chǎn)生的免疫反應較弱其載體容量和安全性方面亦改進(jìn)許多。第三代腺病毒載體則缺失了全部的(無(wú)病毒載體，gutless vector)或大部分腺病毒基因(微型腺病毒載體，mini Ad)，僅可保留ITR和包裝信號序列。第三代腺病毒載體最大可插入35kb的基因，病毒蛋白表達引起的細胞免疫反應進(jìn)一步減少，載體中引入核基質(zhì)附著(zhù)區基因可使得外源基因保持長(cháng)期表達，并增加了載體的穩定性。這一載體系統需要一個(gè)腺病毒突變體作為輔助病毒。

應用優(yōu)勢：
腺病毒載體轉基因效率高，體外實(shí)驗通常接近100%的轉導效率；可轉導不同類(lèi)型的人組織細胞，不受靶細胞是否為分裂細胞所限；容易制得高滴度病毒載體，在細胞培養物中重組病毒滴度可達10E+11 PFUml；進(jìn)入細胞內并不整合到宿主細胞基因組，僅瞬間表達，安全性高。因而腺病毒載體在基因治療臨床試驗方面有了越來(lái)越多的應用，成為繼逆轉錄病毒載體之后廣泛應用且最具前景的病毒載體。