轉染問(wèn)題

可能的原因

建議解決方法

轉染效率低

沒(méi)有選擇最合適的轉染試劑

針對待轉染細胞選擇最適的轉染試劑是獲得高轉染效率的關(guān)鍵。如果您對選擇我們哪一種轉染試劑沒(méi)有把握，請致電至info@signagen-china.com尋求技術(shù)支持。

沒(méi)有生成高效率的DNA-轉染試劑復合物

在制備生成DNA-轉染試劑復合物時(shí)，請不要使用任何含有血清的產(chǎn)品。在大多數情況下，使用不含血清的DMEM培養液能獲得高效率的DNA-轉染試劑復合物。
注意：請避免使用Opti-MEM培養液，即使其血清含量較低。

在生成DNA-轉染試劑的過(guò)程中存在抑制復合物形成的抑制劑。

不含血清的培養液是高效DNA-轉染試劑復合物形成的關(guān)鍵。在生成復合物過(guò)程中，避免使用以下化學(xué)物質(zhì)：高濃度的磷酸鹽；硫酸軟骨素；透明質(zhì)酸；硫酸葡聚糖或其它硫酸化的蛋白聚糖等。

陽(yáng)離子型脂質(zhì)體被意外冷凍保存。

請務(wù)必將以下陽(yáng)離子型脂質(zhì)體保存于+4度環(huán)境，-20或者-80度冷藏將顯著(zhù)降低其轉染效率：LipoD293?, LipoJet?和PowerFect?等。

細胞密度未優(yōu)化。

在DNA轉染和DNA–siRNA共轉染過(guò)程中，控制細胞密度在60~70%之間；在siRNA轉染過(guò)程中，控制細胞密度在50%左右。

使用了次優(yōu)化的反應條件，如轉染試劑的用量，DNA用量和DNA-轉染試劑復合物的形成時(shí)間等參數沒(méi)有優(yōu)化。

如果您不清楚最優(yōu)化的反應條件或者不知道如何針對待轉染細胞進(jìn)行條件優(yōu)化，請致電至info@signagen-china.com尋求技術(shù)支持。

確定轉染效率的方法學(xué)問(wèn)題。

建議每次轉染時(shí)，設定一個(gè)陽(yáng)性對照，如綠色熒光蛋白(GFP)。

所使用DNA的啟動(dòng)子不能被待轉染細胞所識別。

在轉染實(shí)驗前，請確認所轉染DNA確實(shí)能在待轉染細胞內表達。

在使用GenMute?，GenJet?, PowerFect?，PepMute? siRNA轉染試劑和LipoJet?
DNA轉染試劑時(shí)，沒(méi)有使用與之匹配的轉染緩沖液。

GenMute?，GenJet?, PowerFect?，PepMute? siRNA轉染試劑和LipoJet?DNA轉染試劑均配有特制的轉染緩沖液。為了獲得高效率轉染，請務(wù)必嚴格按照轉試劑的操作步驟進(jìn)行，在形成DNA-轉染試劑或者siRNA-轉染試劑復合物時(shí)，請務(wù)必使用與之匹配的緩沖液。

將轉染復合物長(cháng)時(shí)間放置于室溫。

轉染復合物的最佳放置時(shí)間和溫度是室溫條件下10~20分鐘，長(cháng)時(shí)間放置會(huì )顯著(zhù)地降低轉染效率，請務(wù)必控制放置時(shí)間在20
分鐘之內。.

使用LipoD293?和PolyJet?轉染試劑時(shí)，細胞的密度太低。

使用LipoD293?和PolyJet?轉染試劑時(shí)，細胞的密度控制在~70%為宜。

極高轉速離心轉染復合物。

在形成轉染復合物時(shí)，標準操作步驟推薦數秒內渦旋混合轉染試劑和DNA或siRNA以生成高效轉染復合物。如果想將粘附于管壁的復合物離心到管底，請務(wù)必使用極低轉速離心，如80g離心5秒鐘足夠，離心轉速太高將顯著(zhù)降低轉染復合物的轉染效率。

對于難轉細胞如MDCK, MB2231，C2C12，SaoS-2等轉染效率很低。

使用了錯誤的轉染操作步驟。

在使用GenJet?，LipoD293?和PolyJet?轉染試劑對MDCK, MB2231，C2C12，SaoS-2等難轉細胞進(jìn)行轉染操作時(shí)，建議使用Advanced Protocol。

細胞毒性大

DNA用量太大。

建議繪制量效關(guān)系曲線(xiàn)來(lái)確定最佳的DNA用量。

轉染試劑用量太大。

建議繪制量效關(guān)系曲線(xiàn)來(lái)確定最佳的轉染試劑用量。

細胞密度太低。

轉染DNA時(shí)，建議細胞密度控制在~70%左右；轉染siRNA或DNA/siRNA共轉染時(shí)，建議細胞密度控制在50~70%為宜，細胞密度太低可導致轉染過(guò)程
細胞毒性增加。

轉染時(shí)細胞狀態(tài)已經(jīng)較差。

我們所生產(chǎn)的所有轉染試劑其轉染效率均不受培養液中的血清影響，因此建議轉染過(guò)程中細胞的培養液使用含有10%胎牛血清和抗生素的完全培養液以改善細胞的狀態(tài)。

穩定轉染時(shí)抗生素加入時(shí)機太早。

請在轉染48小時(shí)后加入選擇用抗生素。

使用PepMute?，GenMute?或者PepMute? Plus siRNA
轉染試劑時(shí)毒性太大。

錯誤地使用了含有血清和抗生素的DMEM培養液來(lái)稀釋轉染試劑和siRNA。

使用PepMute?,GenMute?, GenJet?和PowerFect? siRNA轉染試劑時(shí)，我們推薦務(wù)必使用特制的轉染緩沖液來(lái)稀釋轉染試劑和siRNA以形成高效的轉染復合物并降低細胞毒性。

轉染效果不穩定，不能重現。

轉染時(shí)細胞密度沒(méi)有控制的較為均一，差異太大。

嚴格控制細胞生成條件，務(wù)必使每一次轉染時(shí)細胞的密度較為均一。如果細胞傳代太多，建議重新復蘇一批新鮮細胞進(jìn)行培養。

轉染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁。

轉染試劑儲存問(wèn)題太低。

請務(wù)必不要低溫保存轉染試劑，+4度環(huán)境即可；如果將轉染試劑誤放在-20以下環(huán)境，建議將冰凍的轉染試劑(LipoD293?和LipoJet?轉染試劑除外)溫浴10分鐘后，待完全融化后，再進(jìn)行轉染操作。一般情況下不會(huì )導致轉染效率降低。

轉染復合物出現沉淀。

有過(guò)量的EDTA存在。

將DNA溶于純水而不是TE緩沖液.

在形成轉染復合物時(shí)，有過(guò)量的轉染試劑或DNA/siRNA存在。

確保在轉染復合物形成過(guò)程中，轉染試劑和DNA或者siRNA的用量最好不要超過(guò)標準錯作步驟推薦的劑量。